常規(guī)轉染技術可分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩(wěn)定轉染（*轉染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說，超螺旋質粒DNA轉染效率較高，在轉染后24-72小時內（依賴于各種不同的構建）分析結果，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩(wěn)定轉染，外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體（episome）存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉染細胞能整合，通常需要通過一些選擇性標記，如來氨丙基轉移酶（APH；抗性基因），潮霉素B磷酸轉移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復篩選，得到穩(wěn)定轉染的同源細胞系。

   轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大，許多轉染方法需要優(yōu)化DNA與轉染試劑比例，細胞數(shù)量，培養(yǎng)及檢測時間等。一些傳統(tǒng)的轉染技術，如DEAE右旋糖苷法，磷酸鈣法，電穿孔法，脂質體法各有利弊，其主要原理及應用特點見下表：

;除上述傳統(tǒng)方法外，近年來上推出了一些陽離子聚合物基因轉染技術，以其適用宿主范圍廣，操作簡便，對細胞毒性小，轉染效率高受到研究者們的青睞。其中樹枝狀聚合物（Dendrimers）和聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的轉染性能*，但樹枝狀聚合物的結構不易于進一步改性，且其合成工藝復雜。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個碳個原子，即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿"(proton sponge)體。這種聚陽離子能將各種報告基因轉入各種種屬細胞，其效果好于脂質聚酰胺，經(jīng)進一步的改性后，其轉染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細胞毒性低。大量實驗證明，PEI是非常有希望的基因治療載體。目前在設計更復雜的基因載體時，PEI經(jīng)常做為核心組成成分。
   線型PEI（Line PEI,LPEI）與其衍生物用作基因轉染載體的研究比分枝狀PEI（Branched PEI,BPEI）要早一些，過去的研究認為在不考慮具體條件，LPEI/DNA轉染復合物的細胞毒性較低，有利于細胞定位，因此與BPEI相比應該轉染效率高一些。但zui近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的轉染復合物，從而提高轉染效率，但同時細胞毒性也增大。超高分枝的、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基，在染實驗中發(fā)現(xiàn)這種PEI的毒性低，但轉染效率卻較高。

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PEI轉染操作流程：

 1、細胞傳代：

轉染前24h內分離293T細胞至含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基 中進行傳代培養(yǎng)，接種密度如下：
        6孔板：0.5x10⁶細胞
        10cm培養(yǎng)皿：4.0x106細胞
        15cm培養(yǎng)皿：9.0x106細胞

2 、轉染

轉染前將所有試劑置于室溫。

2.1 質粒DNA的稀釋

在無菌試管中，用無血清的DMEM W / O酚紅培養(yǎng)基（濃度為10％）稀釋質粒DNA（ug）。病毒包裝體（psPAX2）：病毒包膜（pMD2G）和重組質粒DNA的稀釋比例分別為4:2:1。
     

6 孔板：200ul+3ug的DNA
       10cm培養(yǎng)皿：1ml+7-8ug的DNA
       15cm培養(yǎng)皿：2ml+11-12ug的DNA

  2.2 轉染復合體形成

將PEI（1ug/uL）加入已稀釋的總DNA中，PEI與DNA（ug）的混合比率為3:1。加入后立即渦旋混合。
     

6 孔板：9ul PEI復合體（1ug/ul）=9ug
       10cm培養(yǎng)皿：21ul PEI復合體（1ug/ul）=21ug
       15cm培養(yǎng)皿：33ul PEI復合體（1ug/ul）=33ug
將添加到細胞的DNA/ PEI的混合物在室溫下孵育15分鐘。

4 、收獲轉染細胞

轉染后48小時內收獲轉染細胞/或病毒上清。

試劑的配制：
PEI（1ug/ul） Polysciences（CAT＃23966-2配制成儲液：
1、將無內毒素的無菌水加熱至80℃左右溶解PEI，冷卻到室溫。
2、調整pH值至7.0，用0.22um的濾器過濾消毒，分裝后儲存在-20℃。工作液可保持在4℃。

96孔細胞培養(yǎng)板用量

PEI于polyplus轉染效率對比圖

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友情提醒：
Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) 23966-2為Polysciences公司生產(chǎn)的化合物產(chǎn)品，每批產(chǎn)品出廠前都經(jīng)過嚴格的檢測,保證每批產(chǎn)品都*、穩(wěn)定且高品質,但由于作為轉染試劑使用過程中有很多實驗室因素(PH,水純度,稱量的準度,dna純度…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產(chǎn)品純度，分子量及重量缺失破損等相關投訴，針對極個別客戶溶解問題和轉染效率問題我們只能友善解決,所以不能保證您能獲得滿意答復，對于產(chǎn)品應用方法的問題，不作為評價我們售后工作的依據(jù)。
如果我們提供的PEI手冊都無法解答您的問題,建議您可以多看文獻,多調整一下轉染條件,找出適合自己細胞的轉染方法。如果無暇摸索條件,您也可以直接購買我們配好的轉染試劑,這樣免去您很多煩惱,謝謝理解